Аналіз крові РСК що це таке. Що свідчить серологічний аналіз крові? Розділити сироватки та проводити серологічний аналіз

Реакція зв'язування комплементу (РСК) ставиться у дві фази: у першій фазі антиген з'єднують з досліджуваною сироваткою, в якій припускають наявність антитіл і додають комплемент, інкубують термостаті 30 хвилин.

Друга фаза: додають гемолітичну систему (еритроцити барана + гемолітична сироватка). Після інкубації термостаті протягом 30 хвилин враховують результат.

При позитивній РЗК антитіла сироватки, з'єднавшись з антигеном, утворюють імунний комплекс, який приєднує до себе комплемент, і гемолізу не відбудеться. Якщо реакція негативна (антитіл у досліджуваної сироватки немає) – комплемент залишиться вільним і станеться гемоліз.

РЗК застосовується для серологічної діагностики сифілісу, гонореї, висипного тифу та інших захворювань.

Реакції імунітету з використанням мічених антигенів і антитіл засновані на тому, що один з інгредієнтів, що беруть участь в реакції (антигени або антитіла), з'єднують з якоюсь міткою, яку легко можна виявити. Як мітки використовують флюорохроми (РІФ), ферменти (ІФА), радіоізотопи (РІА), електроноплотні сполуки (ІЕМ).

Імуноферментний аналіз (ІФА), як і інші реакції імунітету, використовується: 1) для визначення невідомого антигену за допомогою відомих антитіл або 2) для виявлення антитіл у сироватці за допомогою відомого антигену. Особливість реакції в тому, що відомий інгредієнт реакції з'єднаний із ферментом (наприклад, пероксидазою). Присутність ферменту визначають за допомогою субстрату, що при дії ферменту забарвлюється. Найбільш широко застосовується твердофазний ІФА.

1) Виявлення антигену. Перший етап - адсорбція специфічних антитіл на твердій фазі, як яку використовують полістиролові або полівінілхлоридні поверхні лунок пластикових панелей. Другий етап – додавання досліджуваного матеріалу, в якому передбачається наявність антигену. Антиген зв'язується із антитілами. Після цього лунки промивають. Третій етап - додавання специфічної сироватки, що містить антитіла проти даного антигену, мічені ферментом. Мічені антитіла приєднуються до антигенів, які надлишок видаляється промиванням. Таким чином, якщо в досліджуваному матеріалі є антигени, на поверхні твердої фазиутворюється комплекс антитіла – антиген – антитіла, мічені ферментом. Для виявлення ферменту додають субстрат. Для пероксидази субстратом служить ортофенілендіамін у суміші з Н 2 Про 2 у буферному розчині. Під дією ферменту утворюються продукти, що мають коричневе забарвлення.

2) Виявлення антитіл. Перший етап – адсорбція специфічних антигенів на стінках лунок. Зазвичай у комерційних тест-системах антигени вже адсорбовані на поверхні лунок. Другий етап – додавання досліджуваної сироватки. За наявності антитіл утворюється комплекс антиген-антитіло. Третій етап – після відмивання у лунки додають антиглобулінові антитіла (антитіла проти людських глобулінів), мічені ферментом. Результати реакції оцінюють, як зазначено вище.

Як контроль використовують зразки свідомо позитивні і свідомо негативні, які є в комерційних системах.

ІФА застосовується для діагностики багатьох інфекційних захворюванняхзокрема, ВІЛ-інфекції, вірусних гепатитів.

Імуноблот - це різновид ІФА (поєднання електрофорезу та ІФА). Методом електрофорезу в гелі поділяють біополімери, наприклад антигени вірусу імунодефіциту людини. Потім переносять розділені молекули на поверхню нітроцелюлози в тому ж порядку, як вони знаходилися в гелі. Процес перенесення називається блот, а отриманий відбиток - блот (англ. blot - пляма). Цей відбиток діють досліджуваної сироваткою. Потім додають сироватку проти глобулінів людини, мічену пероксидазою, потім субстрат, який під дією ферменту набуває. коричневий колір. Утворюються коричневі смуги тих місцях, де антитіла з'єдналися з антигенами. Метод дозволяє виявити антитіла до окремих антигенів вірусу.

Радіоімунний аналіз (РІА). Метод дозволяє визначити кількість антигену в досліджуваній пробі. Спочатку до імунної сироватці приєднують матеріал, ймовірно містить антиген, потім відомий антиген, мічений радіоізотопом, наприклад I 125 . В результаті відбувається зв'язування визначеного (німецького) та відомого міченого антигену з обмеженою кількістю антитіл. Оскільки мічений антиген додається у певній дозі, можна визначити, яка його частина зв'язалася з антитілами, а яка залишилася вільною через конкуренцію з неміченим антигеном і була видалена. Кількість міченого антигену, що зв'язався з антитілами, визначають за допомогою лічильника. Воно обернено пропорційно кількості визначеного антигену.

Імуноелектронна мікроскопія (ІЕМ). До антигену, наприклад, до вірусу грипу, приєднується специфічна антисироватка, мічена електроноплотною речовиною. Як мітки застосовують металовмісні білки (феритин, гемоціанін) або колоїдне золото. При мікроскопії в електронному мікроскопі роблять фотографії, на яких видно віріони грипу з темними точками, що приєдналися до них, - молекулами мічених антитіл.

Контрольні питання

Набутий імунітет, відмінність його від спадкового (видового, вродженого). Види набутого імунітету.

Завдання.У сім'ї захворіла на дифтерію дитина Валерій, трьох років. Інші члени сім'ї не захворіли, причому мати перехворіла на дифтерію в дитинстві, а батько був щеплений дифтерійним анатоксином. Старша сестра Наташа, п'яти років, свого часу не була щеплена дифтерійним анатоксином через медичні протипоказання, тому довелося провести їй екстрену профілактику за допомогою протидифтерійної антитоксичної сироватки. Молодший брат, Віталій, трьох місяців не захворів, хоча нічим не був щеплений. У будинку є кішка та собака, вони не захворіли. Назвіть для кожного з членів сім'ї та для тварин вид імунітету, завдяки якому вони не захворіли.

Що таке антиген? Які речовини можуть бути антигенами? Повноцінні антигени та гаптени, чим вони відрізняються один від одного? Структура антигену. Як називається частина молекули антигену, що визначає його специфічність? Назвіть відомі вам антигени. Що таке аутоантигени? Антигенна будова мікробної клітини. Джгутикові та соматичні антигени; локалізація, літерне позначення, хімічна природа, ставлення до температури, спосіб отримання, практичне застосування. Анатоксин, його властивості, застосування, одержання. Яка тканина становить імунну систему? Вкажіть центральні та периферичні органи імунної системилюдини. Опишіть процес формування гуморальної та клітинної імунної відповіді. Вкажіть клітини, які здійснюють захоплення та перетравлення антигену; клітини, що взаємодіють при формуванні гуморального імунітету, клітинного імунітету; клітини, які трансформуються та перетворюються на плазмоцити, що продукують антитіла; клітини, що стимулюють цей процес; клітини, що пригнічують імунну відповідь; клітини, які вбивають пухлинні клітини, та заражені вірусом клітини. Що таке антитіла? Як отримати імунну сироватку? Як отримати сироватку, яка б нейтралізувала правцевий токсин? Проти яких антигенів утворюються антитоксини, аглютиніни, гемолізини? Які антитіла утворюються під час введення в організм дифтерійного анатоксину? дифтерійних бактерій? Хімічна природа та структура антитіл. Що таке активний центр імуноглобуліну? Перерахуйте класи імуноглобулінів, їх властивості. Вкажіть клас імуноглобулінів, здатних проникати крізь плаценту. До якого класу належать секреторні імуноглобуліни? Динаміка накопичення антитіл. Чим відрізняється вторинна імунна відповідь від первинної? Як у практичній медицині використовуються знання про динаміку імунної відповіді? Що таке реакції імунітету, який їхній механізм, фази реакції. У яких 2 напрямках використовують реакції імунітету? Перерахуйте реакції імунітету.

Завдання.Поставте замість пропущених слів «анатоксин» або «антитоксин»: _________ є антигеном, _________ є антитілом, __________ створює при введенні в організм активний імунітет, __________ створює при введенні в організм пасивний імунітет, __________ отримують шляхом імунізації тварин, __________ отримують з токси формаліном та теплом, ___________ нейтралізує токсини, __________ викликає в організмі утворення антитіл.

Реакція аглютинації: що таке аглютинація, що є антигеном, що – антитілом; способи постановки, які контролі ставляться і навіщо; як мають виглядати контролі. Аглютинуючі сироватки, що вони містять, як їх отримують, для чого застосовуються; що таке титр аглютинуючої сироватки? Реакція непрямої (пасивної) гемаглютинації: що служить антигеном у цій реакції, як його одержують, механізм реакції. Що таке еритроцитарний діагностикум? Що таке античний еритроцитарний діагностикум? Реакції преципітації: що таке преципітація, що є антигеном; як отримати сироватку, що преципітує? Що таке титр преципітуючої сироватки? Методи постановки, практичне застосування.

Реакція зв'язування комплементу (РЗК): принцип РЗК; що утворюється при взаємодії імунної сироватки зі специфічним антигеном; що відбувається з комплементом, якщо він є при цьому взаємодії? Яка доля комплементу у тому випадку, якщо між антигеном та антитілами немає специфічної спорідненості? Якщо кінцевим результатом РСК є гемоліз, що це означає – позитивний чи негативний результат? Методика постановки РЗК. Чому досліджувану сироватку треба інактивувати? Гемолітична сироватка: що містить, як її одержують, що таке титр і як його визначають? Комплемент: хімічна природа, ставлення до високій температурі, де міститься? Як можна зруйнувати комплемент? Що практично застосовується як комплемент?

Завдання.На одязі людини, звинуваченої у вбивстві, виявлено пляму крові. За допомогою якої реакції можна визначити, чи це людська кров; що в цій реакції буде антигеном і що антитілами; який діагностичний препарат потрібно мати у лабораторії для цієї реакції, як його готують?

Завдання.Як за допомогою реакції преципітації визначити, чи доставлений для аналізу зразок м'яса великої рогатої худоби або м'яса коня; які необхідні діагностичні препарати?

Реакція преципітації в агаровому гелі, способи постановки, практичне застосування.

Серологічне дослідження, або, іншими словами – серологічний аналіз, це дослідження біологічних матеріалів у лабораторії. Цей аналіз дозволяє встановити наявність хвороботворних бактерій у досліджуваному організмі, або – у продуктах, що проходять контрольну перевірку.

Серологічні методи діагностики

Дослідження сироваток або інших біологічних об'єктів (молоку, жовчі, слини, змивів слизової оболонки кишечника, а також - копроматеріалів) дає досить достовірне уявлення про відповідь організму на впровадження інфекційного агента. Слід зазначити, що застосування серологічних методівдослідження має не тільки діагностичне значення, але дає достовірні відомості про рівень захисту організму, стан популяційного імунітету, циркуляцію різних типів ротавірусів в обстежуваному регіоні. Результати серологічних обстежень можуть також надати інформацію для оптимізації антигенного складу профілактичних препаратів та використовуватися з метою оцінки імунологічної ефективності вакцин.

Однак слід зазначити, що необхідність дослідження парних сироваток крові, що забираються з інтервалами 1,5-2 тижні, та наявність експресних методів діагностики знижують діагностичну цінність серологічних реакцій.

Тому традиційні серологічні тести - реакції зв'язування комплементу (РСК) та реакція гальмування гемаглютинації (РТГА), знаходять нині лише обмежене застосування. Проте простота цих методів, доступність і дешевизна реагентів роблять їх застосовними в лабораторній практиці. Постановка РСК та РТГА здійснюється за загальноприйнятими методиками.

Прикладом використання РЗК для вивчення поствакцинального імунітету є робота К. Мідхана (1989 р.). При обстеженні сироваток від 116 дітей у віці 5 місяців достовірні сероконверсії, за даними РЗК, були відзначені в 44% випадків, а за результатами реакції нейтралізації (PH) та імуноферментного аналізу (ІФА) – у 83 та 96% відповідно.

Дослідження імунітету

З метою вивчення популяційного імунітету за допомогою РЗК нами було обстежено 1246 сироваток хворих на ОКЗ у віці від кількох місяців до 80 років і старше. Показано, що середньогеометричні титри комплементзв'язуючих антитіл були найбільш високими у вікових групах 2 - 4 та старше 60 років, що підтверджує отримані нами раніше дані про найбільшого поширенняротавірусної інфекції серед осіб зазначених вікових груп

Аналіз на ротавірус

РТГА використовується у вивченні ротавірусної інфекції частіше, ніж РЗК, і, як правило, у поєднанні з іншими лабораторними тестами. Так, Andrade J. Р. та ін. застосували РТГА, імуно-блот, блок ІФА для вивчення антитіл до структурних білків ротавірусу VP2, VP4, VP6 та VP7. За даними авторів, у дітей від 2 до 4 років виявили антигемагглютинуючі антитіла до ротавірусів у 70-80%.

Залежно від рівня антитіл до певних білків, за даними РТГА, автори виділили 4 групи осіб. До I та II групи (60%) увійшли діти з високим рівнемантитіл до VP4 та VP7 та були класифіковані як «імунні». У ІІІ групу (4%) віднесені особи з низьким рівнемантитіл до VP7 та VP6, так звані «частково імунні». Діти IV групи (36%), у яких, за даними РТГА, антитіла не були виявлені, позначені як «неімунні» та склали групу ризику, тому що серед них можливий розвиток вираженої ротавірусної інфекції. Слід зазначити, що у цьому спостереженні показники чутливості РТГА та блок ІФА були цілком порівнянними.

РТГА неодноразово використовували вивчення структурного білка VP4. Дослідження показали, що його гемаглютинуюча активність специфічно інгібується антисироваткою, тим самим підтверджуючи, що VP4 є гемаглютиніном ротавірусів. Аналогічні дані були опубліковані раніше М. Єзекієлем (1995).

Таким чином, представлені роботи показують, що РЗК та РТГА все ще застосовують при вивченні ротавірусної інфекції, проте ці методи мають допоміжний характер і повинні дублюватися іншими тестами.

Нейтралізаційні тести

Реакція нейтралізації заснована на здатності імунних сироваток людини або тварин нейтралізувати репродукцію вірусу і цим запобігти пов'язаним з цим феноменом проявам. Залежно від біологічної моделі цими проявами можуть бути: розвиток захворювання зі специфічною клінікою, репродукція та виділення вірусу, вироблення специфічних антитіл, а також поява цитопатичного ефекту або утворення пляк при використанні культури клітин.

Макробіологічні моделі в даний час застосовуються переважно у ветеринарії, виявлення вірусів у людей у ​​більшості випадків проводиться на культурі клітин, як первинних, так і переливаються. Методи PH поділяються на дві групи за принциповою схемою постановки. В одній групі методів нерозведена сироватка поєднується із серійними розведеннями вірусу, в іншій – розведення сироватки випробовуються із постійною дозою вірусу. Для постановки реакції нейтралізації переважним є збудник, що викликає виражений цитопатичний ефект або інтенсивно репродукується в біологічній моделі.

Однак ротавіруси, на жаль, мають слабо виражений цитопатичний ефект, що переконливо продемонстрували дослідники під керівництвом Б. Вебера (1992 р.). Дослідження 121 проби калу хворих на ОКЗ дітей з використанням класичного методу виділення вірусу на клітинах МА-104 під контролем ЦПД виявило лише 4 позитивні випадки (3,3%), тоді як застосування сучасних методіввиявлення ротавірусів (ІФА, ПЛР, ЕФ у ПААГ) дозволило підвищити цей показник до 54,4%. Отже, для підвищення чутливості PH потрібні додаткові методичні прийоми, що сприяють візуалізації редукції вірусу, в якості яких використовуються: радіоактивна або імунофлюоресцентна мітка, плякобразование, імунопероксидазна забарвлення і т. д. При цьому слід зазначити, що сам принцип визначення рівня віруснейтра класичному методу PH, відрізняючись від нього тільки способом вирішення, тобто візуалізацією віруснейтралізуючої активності сироватки. У цьому випадку активність сироватки визначають за її здатністю пригнічувати прояви інфекційних властивостей вірусу.

В даний час у більшості досліджень використовуються два методи вимірювання кількості віруснейтралізуючих антитіл до ротавірусу. Один із них заснований на підрахунку числа індивідуальних вірусінфікованих клітин (метод пляк), що специфічно зв'язуються з антитілами, кон'югованими флюоресцентом. В іншому тесті про рівень нейтралізації вірусу судять щодо зниження продукції вірусного антигену ім-муноферментним методом. Порівняльне вивчення обох методів показало лінійну залежність між показниками ІФА та числом пляк-формуючих одиниць для кожного прото-типного штаму серотипу ротавіруса: Wa, DS-1, Р, VA-70. Отримані дані дозволяють легко визначити розведення сироватки, що забезпечує нейтралізацію 60% інфекційного вірусу (титр антитіл, що нейтралізує). Виявилося, що титри антитіл при тестуванні матеріалів обома методами однакові і обидва тести не різняться по відтворюваності результатів. Деяка перевага методу з використанням антитіл, мічених флюоресцеїном, на думку авторів, полягає у більшій об'єктивності обліку результатів (автоматизована реєстрація) та у меншій трудомісткості.

Для вимірювання титрів віруснейтралізуючих антитіл використовують модифіковану PH за допомогою блокування ІФА за допомогою моноклональних антитіл.

• вивченню інтенсивності вироблення віруснейтралізуючих антитіл (ВНА) при природній інфекції та вакцинації;
• освіті ВНА до різних структурних білків ротавірусів;
• оцінці ролі ВНА сироваток крові та секреторних антитіл слини та слизової оболонки кишечнику в захисті від природної інфекції (Ward R. et al., 1990, 1992, 1993, 1995, 1997).

На закінчення необхідно підкреслити, що реакція нейтралізації в різних її модифікаціях до теперішнього часу широко використовується як в експериментальних, так і клінічних дослідженнях і, володіючи високою чутливістю та специфічністю, є еталоном для інших серологічних методів.

Преципітаційний аналіз

Преципітаційні тести засновані на взаємодії сироватки з вірусними антигенами за допомогою осмотичних процесів або під впливом електричного поля гелевому середовищі або іншого виду носія. Одним з таких методів є реакція зустрічного імуноелектрофорезу (ВІЕФ). Автори досліджували сироватки крові здорових та хворих на ротавірусну діарею дорослих та дітей, а також препарати специфічного імуноглобуліну на наявність антитіл до людського ротавірусу методом ВІЕФ у 7% агарозі з додаванням 4% поліетиленгліколю. Виявилося, що антитіла до RV циркулювали досить широко та виявлені у хворих дорослих та дітей у 90,2-87,7% відповідно, а також у 78,4% здорових дітей віком до 1 року. Усі 32 серії імуноглобуліну містили антитіла до РВ у титрах 1:4-1:128. На думку авторів, метод придатний вивчення популяційного імунітету.

Радіоімунопреципітація

Інший преципітаційною методикою є радіоімунопреципітація. Автори використовували цей метод для вивчення імунної відповіді до структурних та неструктурних білків при первинній ротавірусній інфекції та показали, що імунна відповідь була більш виражена до VP4, ніж до VP7.

При вивченні сироваткової та секреторної імунологічної відповіді на застосування тетравалентної реассортантної вакцини у новонароджених Для цього була використана радіоімунологічна техніка дослідження поряд з ІФА та PH. При цьому було показано, що імунна відповідь у сироватці залежить від дози антигену, що вводиться; Що ж до виявлення антитіл у слині, то автори пояснюють їхню появу із споживанням грудного молока.

Реакція радіоімунопреципітації використовується і в тонких науково-дослідних роботах. Так, Дж. Тоссер використав цей метод для вивчення топології білка VP6 у структурі геному і висловили припущення, що VP 6 бере участь у освіті каналів внутрішнього капсиду.

Інші дослідники у 1994 році також використовували метод радіоімуннопреципітації для вивчення імунологічних зрушень при ротавірусній інфекції. Автори показали, що в гострому періоді реєструються, головним чином, IgA до VP2 і VP6, тоді як у період реконвалесценції знижувалася інтенсивність вироблення секреторних антитіл (IgA) не тільки до VP2, але й до інших структурних та неструктурних білків. Пізніше аналогічні дані були отримані із застосуванням радіоімунопреципітаційного методу. Автори показали, що в імунологічному процесі, крім VP4 та VP7, беруть участь також VP2, VP6 та NSP2.

Таким чином, імунопреципітація використовувалася з діагностичною метою для вивчення імунної відповіді при природній ротавірусній інфекції.

У останні рокиімунопреципітацію замінив метод радіоімунопреципітації, який застосовується для оцінки поствакцинального та постінфекційного імунітету при RV інфекції та для тонких науково-дослідних розробок.

Гібридизаційні методи

Для визначення антитіл до ротавірус широко застосовують метод імуноблоту. Прикладом використання Western-blot у діагностиці ротавірусної інфекції служить робота Х. Ушижими (1989 р.), який, за допомогою імуноблотингу, охарактеризував специфічність антитіл до структурних білків RV у 21 дитини з ОКЗ, а також рівень копроантитіл класів IgA та IgG у неінфікованих дітей. Автори висловили припущення, що імуно-блотинг може дозволити встановити діагноз захворювання на одну пробу копроантитіл без дослідження парних сироваток крові. Можливість застосування Western-blot для визначення рівня антитіл до VP1, VP2, VP4, VP6 та VP7 була продемонстрована Павловим І. та ін. (1991). Автори досліджували сироватки крові людей і тварин на наявність антитіл до штамів ротавірусів SA-11, DS-1, Wan Ito і дійшли висновку, що Western-blot може бути успішно використаний для оцінки імунітету в клінічній практиці.

Вважають, що імуноблот може бути використаний для підтвердження діагнозу ротавірусної інфекції без використання парних сироваток по одній пробі копроантитіл.

Поряд з РТГА та ІФА, імуноблот використовували для вивчення популяційного імунітету. Виявлено групу осіб, неімунних по відношенню до VP2, VP4, VP6 та VP7, які представляють групу ризику, що насамперед потребує захисту засобами активної та пасивної імунізації (Andrade J. Р. et al., 1996).

Застосування імуноблоту у вивченні серологічних зрушень у процесі природної інфекції RV відзначають і Begue R. et al. (1998). Автори підтвердили, що в імунній відповіді на інфікування найчастіше беруть участь антитіла до VP2 і VP6, менш часто - до VP7 і VP4.

Імунофлюоресцентний аналіз

Імунофлюоресцентний метод у непрямому варіанті з використанням антивидових сироваток, мічених флюорохромом, застосовується для титрування випробуваних сироваток на клітинах, заражених ротавірусами. В основі реакції лежить специфічна взаємодія мічених антитіл та гомологічного антигену, при цьому комплекс антиген-антитіло легко виявляють за допомогою люмінесцентного мікроскопа.

Використовуючи цей метод, автори провели серологічне обстеження двох груп південноамериканських індіанців та виявили високий відсоток серопозитивних осіб в обох групах: 67,8 та 77,4% за даними ІФА та 45,5 та 56,7% за результатами ІФМ відповідно.

В іншому дослідженні, присвяченому визначенню рівня антитіл до RV групи С у пуповинній крові за допомогою ІФМ, було показано, що у 30% жінок дітородного віку виявлялися ці антитіла, що свідчать про перенесену інфекцію.

Імуноферментний аналіз використовується в даний час поряд з PH у серологічній діагностиці ротавірусної інфекції надзвичайно широко. Цей метод, заснований на використанні антитіл або антигену, мічених ферментом, завдяки простоті виконання та економічності найбільш прийнятний та перспективний для серологічної діагностики ротавірусної інфекції. Метод дозволяє проводити масові сероепідемічні обстеження населення, оцінювати імунологічну та епідеміологічну ефективність вакцин, вивчати захисну роль антитіл різних класів у різних біологічних рідинах людського організму, а також здійснювати серологічну діагностику ротавірусної інфекції.

Численні дослідження за допомогою ІФА були проведені Р. Азередо (1989 р.), які показали, що кількість хворих на ОКЗ встановленої ротавірусної етіології була значно нижчою за рівень їх інфікованості за результатами серологічного обстеження. Ці дані виявили, що багато клінічні випадкиротавірусні інфекції не діагностуються методом виявлення RV у фекаліях. Подальші дослідження щодо вивчення поширеності ротавірусної інфекції підтвердили це припущення. При проведенні сероепідеміологічних обстежень було виявлено, що 50-70% населення мали високий рівень антитіл, що свідчить про широку циркуляцію RV в людській популяції.

Ще більші можливості відкриває ІФА щодо динаміки рівня антитіл, що належать до різних класів імуноглобулінів. Так, за даними автори методики в 1989 стверджують, що в процесі вакцинації достовірний приріст антитіл до RV в крові відзначався в 83-96%. Антиротавірусні антитіла класів IgA та IgG однаково добре виявляли ІФА та PH за редукцією пляк – 67,6 та 70,0% відповідно. Сероконверсія антитіл класу IgM була виявлена ​​у 53 та 44% дітей методами ІФА та РСК відповідно. За результатами аналізу інтенсивності вироблення антитіл різних класів автори зробили висновок, що найбільш ефективним, простим і швидким методом виявлення сероконверсій після вакцинації є спосіб виявлення антитіл IgA за допомогою ІФА.

Цей висновок знайшов своє підтвердження і в роботі Р. Бішопа (1996), в якій зазначено, що за результатами обстеження 68 пар мати-дітя з діагностованою RV інфекцією показано, що виявлення антитіл класу IgA за допомогою ІФА в копроматеріалах є найбільш чутливим маркером як клінічно вираженої, і безсимптомної інфекції. Аналогічні результати при обстеженні дітей із вираженою RV діареєю було отримано Дж. Коломіною 1998 року.

Проте вивчення інтенсивності сероконверсій необхідне дослідження парних сироваток, що значно подовжує процес діагностики. У той самий час загальновідомо, що поява антитіл класу IgM є свідченням початку інфекційного процесу. За нашими даними, отриманими при обстеженні хворих на ротавірусну інфекцію методами ІФА та РСК, виявилося, що, за результатами ІФА, всі обстежені особи містили в крові IgM антитіла до RV, у той час як за даними РСК – лише у 77% (Р

В останні роки з реалізацією можливості визначення гено- та серотипоспецифічних антитіл ІФА став воістину універсальним методом вивчення ротавірусної інфекції, який використовується:

• при вивченні вироблення антитіл класів IgA, М, G до окремих структурних та неструктурних білків RV;
• в оцінці імунологічної ефективності різних видіввакцин: атенуйованих, холодоадаптованих, ДНК-ових, реассортантних;
• при вивченні вироблення антитіл у різних біологічних рідинах організму в умовах природної інфекції та при імунізації.

Таким чином, як випливає з представлених даних, та імунологічні аспекти ротавірусної інфекції вивчають за допомогою широкого спектру лабораторних методів. Внаслідок цього вибір оптимального методу дослідження з урахуванням його роздільної здатності, економічних та часових витрат досить складний і залежить від завдань, що стоять перед дослідниками, а також оснащеності лабораторії. І все ж таки з різноманіття методів, на наш погляд, слід виділити два - реакцію нейтралізації на культурі клітин і імуноферментний аналіз, - Забезпечують вивчення антитіл до різних класів імуноглобулінів. Особливу перспективність цих методів для використання у широкій практиці визначає реалізована можливість експрес-діагностики ротавірусної інфекції.

Серологія(від латів. serum - «сироватка», logos - «наука») є розділом імунології, який вивчає специфіку взаємодії сироваткових антитіл з антигенами.

Основа діагностики - виявлення специфічних антитіл, які утворюються як реакція на інфікування організму певним антигеном. Залежно від того, які антитіла виявлені в крові, робиться висновок про характер інфекції, а кількість цих антитіл говорить про рівень активності інфекційного захворювання.

Матеріал, взятий на дослідження в рамках серологічного аналізу крові, вивчається на предмет , та інших небезпечних захворювань- Герпесу, кишкових інфекцій, краснухи, токсоплазмозу, хламідіозу, кору, хламідіозу. Крім того, це дослідження дозволяє утвердити групу крові, визначити специфічність білків.

Отже, серологічні дослідження проводять:

• якщо поставлено попередній діагноз і тепер потрібне його підтвердження. Дослідження ґрунтується на додаванні відповідного антигену в сироватку крові. Реакція у відповідь дозволяє зробити висновок про наявність або відсутність захворювання;
• якщо діагноз поставити не вдається. В рамках дослідження до крові додають антитіла та визначають вид антигенів, що дозволяє визначити конкретне захворювання;
• якщо необхідно .

Таким чином, серологічний аналіз крові допомагає поставити діагноз або призначити найбільш ефективне лікування— за мінімальних тимчасових та фінансових витрат.

До переваг серологічних досліджень можна віднести:

• можливість виявлення патологічних мікроорганізмів на ранніх стадіях інфекції;
• контроль розвитку захворювання та рівень ефективності терапії;
• відсутність необхідності спеціальної підготовки перед взяттям біоматеріалу;
• оперативність. Результат буде доступний за дві-три години, що в умовах стаціонарного лікування дуже важливо;
• фінансову доступність реагенту, що дозволяє проводити проби так часто, як це потрібно;
• відсутність протипоказань.

Як проводиться серологічне дослідження

Забір крові проводиться з ліктьової вени. Важливий момент – кров береться не шприцем, а самопливом – у вену вводиться голка без шприца та збирається у пробірку до п'яти мл крові. Проводиться процедура з ранку.

Залежно від реакцій, що лежать в основі дослідження, виділяють декілька видів процедур:

1. реакція нейтралізації. Ґрунтується на властивості антитіл імунної сироватки реагувати як нейтралізуючий засіб на мікроорганізми або токсини, попереджаючи їх негативний вплив на організм;
2. реакція аглютинації. Може бути прямою або непрямою. У першому випадку йдеться про вивчення сироватки крові на предмет присутності антитіл (здійснюється вкидання вбитих мікробів у матеріал, і оцінюється реакція — якщо є осад у вигляді пластівців, позитивна реакція), непряма реакція заснована на введенні в матеріал еритроцитів з адсорбованими на них антигенами ( фестончастий осад говорить про позитивної реакції);
3. реакція преципітації. Розчин антигену нашаровується на імунну сироватку (виконує роль рідкого середовища). Використовується розчинний антиген. Якщо комплекс антиген-антитіло випадає в осад, реакція вважається позитивною;
4. реакція з участю комплементу. Область застосування – виявлення інфекційних захворювань. Активується комплемент та досліджуються реакції;
5. реакція з міченими антигенами та антитілами. Ґрунтується на тому, що антигени тканин або мікроби, оброблені особливим чином, починають випромінювати світло під впливом УФ-променів. Метод широко застосовується як при діагностиці антигенів, але й визначення гормонів, ферментів, лікарських засобів.

До здачі аналізу необхідно підготуватися: за чотири дні пацієнт повинен відмовитися від прийому серцевих препаратів, потрібно також виключити алкоголь у будь-якому його прояві, гостру та жирну їжу, солодощі, обмежити фізичні зусилля, уникати стресів.

Якщо не дотримуватись цих правил, підвищується ризик хибнопозитивного результату. Перед призначенням повторного складання аналізів лікар обов'язково повинен з'ясувати, що робив пацієнт за день до процедури, і дати рекомендації щодо правильної підготовки до обстеження.

Серологічний аналіз: розшифровка

Серологічне дослідження крові - аналіз, який дозволяє визначити/підтвердити тип збудника інфекції, допомагає фахівцю поставити діагноз. Це незамінна допомога, якщо лікар не може підібрати лікарську терапію, оскільки збудники різних захворювань відрізняються різною чутливістю до дії конкретних ліків та антибіотиків.

Після завершення процедури збору матеріалу лаборанти приступають до наступного етапу — розшифровують показники. Так, якщо в крові у пацієнта антитіла не виявлено, можна дійти невтішного висновку, що у організмі немає інфекцій — результат аналізу у разі позитивний.

Але такий стан речей, скоріше, виняток із правил: якщо є симптоми захворювання, серологічні дослідження виявляють та доводять наявність серйозної патології в організмі.

Спочатку в організмі за допомогою аналізу знаходять збудників захворювань, далі оцінюють кількість антитіл, на підставі чого роблять висновок про те, наскільки серйозно розвинена інфекція.

Серологічне дослідження на гепатит, ВІЛ, сифіліс: особливості

Сифіліс . При проведенні аналізу на сифіліс фахівці шукають білки, які відповідають за надходження до людського організму збудника інфекції — йдеться про блідо-трепонему. Як біологічний матеріал у цьому випадку виступає сироватка крові.

. Вірусні гепатити- Серйозні інфекційні захворювання, небезпека яких полягає в тому, що вони досить довгий час можуть жити в організмі, ніяк не проявляючи себе. Виявити захворювання в ранній фазі, коли воно краще піддається лікуванню, можна провівши аналіз на маркери – маркери з'являються у крові після перенесеного захворювання чи введення вакцини.

Потрібно розуміти, що виявлення збудника можливе лише через 1,5-2 місяці після інфікування. Якщо аналіз здає вагітна жінка, можливий хибнопозитивний результат.

Рекомендуємо до перегляду медичний сайт https://tabletix.ru/. На сайті знайдете корисну інформацію, лікарські думки.
Якщо ви спостерігаєте один або кілька симптомів, зазначених нижче, варто задуматися про здачу серологічного аналізу:

• блювання;
• поганий апетит чи його відсутність;
• безпричинне безсилля організму, перевтома;
• жовтуватий колір обличчя;
• зміни кольору калу та сечі.

ВІЛ. Якщо показав позитивний результат, це не свідчить, що пацієнт інфікований СНІДом. Якщо зараження відбулося нещодавно (не більше двох місяців тому), наявність антитіл не дає змоги визначити факт розвитку захворювання. Призначається повторне дослідження.

Серологічний аналіз крові- Найважливіший метод дослідження, основне призначення якого полягає в оперативному виявленні вірусів, інфекцій, мікробів в організмі.

Цей унікальний лабораторний інструмент дозволяє визначити будь-яке захворювання, яке є наслідком пригнічення імунітету, тому не лінуйтеся, а регулярно здавайте аналіз, щоб мати можливість вчасно виявити хворобу і швидко її позбутися.

8 057

Що таке серологічні дослідження, навіщо вони проводяться, які основні методи серологічної діагностики?

Серологічні дослідження - це методи вивчення антигенів або антитіл у біологічному матеріалі хворих, що ґрунтуються на певних реакціях імунітету. Виявлення у біологічному матеріалі антитіл до збудника інфекції чи антигенів дозволяє встановити причину захворювання.

не мають 100% специфічністю та чутливістю при діагностиці інфекційних захворювань. Тому оцінювати їх результати потрібно з урахуванням клінічної картинизахворювання. Цим обумовлена ​​необхідність використання для діагностики інфекції кількох тестів, а також застосування методів Western-blot, що підтверджують результати скринінгових методів

«Імуноблот (Вестерн-блот, Western-blot) є фактично кінцевим верифікаційним (підтверджуючим) методом у ланцюзі імунологічних досліджень, які дозволяють зробити остаточний лабораторний висновок. Особливо важливий цей тест для підтвердження або спростування інфекційного захворювання (наприклад, кашлющ, бореліоз тощо). Метод Вестрен-блоту, зазвичай, необхідний після виявлення позитивних антитіл класу IgG інфекційного процесу, т.к. саме в такій комбінації відбувається більш правильна лабораторна інтерпретація результатів та подальша тактика лікування пацієнта. Для постановки Вестерн-блоту використовують спеціальні нітроцелюлозні смужки, на які методом горизонтального і вертикального імунофорезу перенесені білки в порядку наростання молекулярної ваги. Антитіла сироватки пацієнта взаємодіє з білками у певних зонах смужки, а далі відбувається перебіг реакції аналогічний імуноферметному аналізу (ІФА)»,- пояснює к.мед.наук, медичний директор лабораторії СІНЕВО Україна, Оксана Владиславівна Небильцова.

Біологічний матеріал, що використовується для серологічного дослідження

• Сироватка крові
• Слина
• Фекальні маси

Для діагностики яких станів використовуються серологічні дослідження

Метою серологічних досліджень є встановлення ефективності проведеного лікування після одужання пацієнта, а також виявлення рецидиву захворювання. Крім того, серологічні методи можуть виявити такі захворювання як:

• Амебіаз
• Лямбліоз
• Описторгосп
• Трихінельоз
• Токсокароз
• Цистицеркоз
• Ехінококоз

Основні методи, що використовуються в серологічній діагностиці

Реакція імунофлюоресценції (РІФ, метод Кунса)

Різновиди методу:

Прямий: мікроби або антигени тканин або мікроби обробляються спеціальними сироватками з антитілами, а також міченими флюорохромами, що світяться в УФ-променях. Бактерії, таким чином, світяться у вигляді облямівки зеленого кольору по периферії клітини. Спостерігається у люмінісцентному мікроскопі.

Непрямий: мазки обробляються антитілами антимікробної кролячої сироватки. Потім антитіла, які не зв'язалися з антигенами бактерій, відмиваються. Таким чином, виявляються антитіла, що залишилися на мікробах. У результаті, утворюється комплекс мікроб + антикролячі антитіла + антимікробні кролячі антитіла, позначені флюорохромом. Цей комплекс спостерігається у люмінесцентному мікроскопі.

Для оцінки результатів існує чотирибальна шкала, яка характеризується інтенсивністю поверхневого жовто-зеленого свічення клітин антигенів:

Дуже слабке свічення клітини

Слабке світіння периферії клітини

+++/++++ яскраве свічення клітини

Титром реакції вважається розведення сироватки з результатом результату реакції +++ або ++++.

Реакція непрямої гемаглютинації (РНГ)

Реакція пасивної або непрямої гемаглютинації використовується при діагностики інфекцій, викликаних найпростішими, бактеріями та рикетсіями.

Методика складається з кількох етапів. Спочатку еритроцити обробляються «відмиваються» ізотонічним розчином хлориду натрію, після, за необхідності, - розчином таніну 1: 20000, далі сенсибілізуються розчинними антигенами. Після обробки буферним ізотонічним розчином натрію хлориду, антиген готовий до вживання. Сироватку розводять у пробірках ізотоничним розчином хлориду натрію, після чого до кожної розведеної сироватці додають еритроцитарний діагностикум.

Результати оцінюють характером осаду еритроцитів:

Слабка інтенсивність

Середня інтенсивність

Інтенсивна реакція

Різко інтенсивна реакція

Позитивним вважається результат реакції з інтенсивною реакцією +++ або різко інтенсивною реакцією ++++, у яких еритроцити покривають все дно пробірки.

Імуноферментний аналіз (ІФА)

Метод має високу специфічність і чутливість, більше 90%. Основна перевага - можливість виявлення інфекціїі простеження динаміки процесу, який вказує рівень антитіл.

Застосовується аналіз для діагностики широкого кола інфекцій, у тому числі:

• Віч інфекція
• Вірусні гепатити
• Цитомегаловірусна інфекція
• Герпесна інфекція
• Токсоплазмова інфекція

Нові рекомендації щодо здорового харчування за результатами нового дослідження

Антиген або антитіло фіксується на твердих планшетах, потім за допомогою ферментної мітки виявляються комплекси антиген - антитіло.

ІФА має ряд переваг перед рештою серологічних методів. Реакція найбільш чутлива, а тестах використовуються універсальні реагенти. Аналіз відрізняється швидкістю, можливістю дослідження імуноглобулінів різних класів. Нині ІФА одна із основних методів лабораторної діагностики.

Оцінка результатів ІФА здійснюється автоматично за допомогою спеціальних приладів. У деяких випадках також допускається візуальний облік результатів реакції. Вірогідність серологічної діагностики залежить від організації лабораторного контролю, що складається з кількох процедур, призначених для оцінки якості результатів.

Аналіз на сифіліс є одним із найпоширеніших серед лабораторних досліджень. Широко використовуються аналізи на сифіліс під час проведення профілактичних обстежень. З допомогою мікроскопії виявляється збудник сифілісу — . За допомогою серологічних реакцій підтверджується діагноз сифілісу, встановлюється діагноз прихованого сифілісу, проводиться контроль ефективності лікування, визначається лікування хворих.

Діагноз сифілісу встановлюється на підставі клінічних даних, виявлення збудників сифілісу у зразках матеріалу та підтвердження діагнозу серологічними методами дослідження. Прояви сифілісу численні та різноманітні, через що хвороба виявляється лікарями різних спеціальностей. Диференціальна діагностика первинного сифілісу проводиться з низкою захворювань.

Мал. 1. На фото первинний прояв сифілісу – твердий шанкер.

Антитіла до блідої трепонеми та серологічна діагностика

При зараженні сифіліс в організмі хворого утворюються антитіла. Серологічна діагностикадопомагає лікарю вивчати динаміку утворення антитіл в організмі хворого на сифіліс у початкових стадіяхзахворювання, у період лікування та після його закінчення, вирішити питання рецидиву захворювання у хворого або повторне зараження (реінфекція), поставити діагноз сифілісу за масових медичних умов.

Антитіла до блідої трепонеми IgM

Першими після зараження починають вироблятися антитіла IgM. Вони починають виявлятися з допомогою серологічних реакцій з другого тижня після зараження. На 6 - 9 тижнях захворювання їх кількість стає максимальною. Якщо хворий не лікувався, антитіла зникають через півроку. Антитіла IgMзникають через 1 - 2 міс. після , через 3 - 6 міс. - Після лікування пізнього сифілісу. Якщо реєструється їх зростання, це служить чи свідчить про повторне зараження. Молекули IgM великі та через плаценту до плоду не переходять.

Антитіла до блідої трепонеми IgG

Антитіла імуноглобуліни IgGз'являються наприкінці першого місяця (на 4-му тижні) з моменту зараження. Їх титр вищий, ніж титр IgM. IgG зберігаються після лікування досить тривалий час.

Неспецифічні антитіла

Існує безліч серологічних реакцій. Це пояснюється антигенною множинністю блідих трепонем. У сироватці крові хворої людини на різних стадіях сифілісу крім специфічних утворюються ті або інші неспецифічні антитіла — аглютинини, комплементзв'язуючі, іммобілізини, антитіла, що викликають імунну флюоресценцію, преципітини та ін. слід скористатися не одним, а комплексом серологічних реакцій (КСР).

Хибнопозитивні аналізи на сифіліс

Відмінною особливістю нетрепонемних тестів є отримання хибно-позитивних реакцій. Антитіла-реагіни, які виробляються в крові людини проти кардіоліпінового антигену, реєструються не тільки при сифілісі, але й при інших захворюваннях: колагенозах, гепатитах, захворюваннях нирок, тиреотоксикозі, онкозахворюваннях, при інфекційних захворюваннях (лепра, туберкульоз, бруцельоз, , скарлатина), при вагітності та місячних циклах, при прийомі жирної їжі та алкоголю. Зазначено, що з віком кількість хибно-позитивних реакцій зростає.

Мал. 2. На фото первинний сифіліс у жінок.

Лабораторна діагностика сифілісу із застосуванням серологічних реакцій

Серологічні тести на сифіліс поділяються на трепонемні та нетрепонемні.

1. Нетрепонемні тести

Як антиген у цій групі тестів використовується кардіоліпіновий антиген. Ліпідні антигени збудників сифілісу найчисленніші. Вони становлять 1/3 сухої маси клітини. За допомогою нетрепонемних тестів виявляються антитіла-реагіни, що виробляються проти кардіоліпінового антигену. До цієї групи входить реакція зв'язування комплементу (РСКкард), реакція мікропреципітації (РМП), реакція швидкого визначення реагінів плазми (RPR) та ін. За допомогою нетрепонемних тестів проводиться первинний скринінг на сифіліс (обстеження груп населення), а можливість отримання результатів у кількісному варіанті дозволяє використовувати ці тести для контролю ефективності лікування. Позитивні результати нетрепонемних тестів мають підтверджуватись трепонемними тестами. Відмінною особливістю нетрепонемних тестів є отримання хибно-позитивних реакцій.

2. Трепонемні тести

У трепонемних тестах використовуються антигени трепонемного походження, виділені із культури блідих трепонем. З їхньою допомогою підтверджуються позитивні результати нетрепонемних тестів. До групи входять: РСКтреп – реакція зв'язування комплементу, РІФ – реакція імунофлюоресценції та її модифікації, РІТ, РІБТ – реакція іммобілізації блідих трепонем, РПГА – реакція пасивної гемаглютинації, ІФА – імуноферментний аналіз.

3. Тести на сифіліс із використанням рекомбінантних антигенів

Антигени для цієї групи тестів отримують генно-інженерним шляхом і використовують у реакціях — РПГА та ІФА, в аналізах імуноблотінгу (ІХ) та імунохроматографічному аналізі.

Мал. 3. Для діагностики сифілісу використовують комплекс серологічних тестів.

Діагностика сифілісу із застосуванням нетрепонемних тестів

Для виявлення сифілісу використовуються нетрепонемні випробування або комплекс серологічних реакцій (КСР). Серологічна діагностика застосовується з 5-го тижня від моменту зараження або з 2-3 тижнів після появи. Антитіла виявляються практично у всіх хворих зі свіжим первинним, . Серологічні реакції позитивні у 70 - 80% хворих з , в 50 - 60% випадків у хворих на третинний прихований сифіліс.

Серологічні реакції із застосуванням нетрепонемних тестів можуть давати хибнопозитивні результати.

Мал. 4. Забір крові щодо аналізу на сифіліс.

Реакція зв'язування комплементу (РСК кард, КСК з КА, реакція Вассермана)

Реакція Вассермана (RW, РВ), винайдена А. Вассерманом понад 100 років тому, сьогодні зазнала безліч змін, проте, як данина традиції, зберегла свою назву до теперішнього часу. Реакція зв'язування комплементу із застосуванням кардіоліпінового антигену призначена не тільки для виявлення антитіл, але й виконується в кількісному варіанті – з різними розведеннями сироватки, що дозволяє використовувати її для контролю ефективності лікування. Низька чутливість та специфічність, отримання хибнопозитивних результатів- Негативні сторони даного виду дослідження.

Суть реакції Вассермана полягає в наступному: антигени, які застосовуються при постановці реакції Вассермана, у разі наявності антитіл до збудників сифілісу в крові людини за допомогою компліменту зв'язуються з ними та випадають у осад. Інтенсивність реакції позначають знаком (+). Реакція може бути негативною (-) - відсутність осаду, сумнівною (невеликий осад або +), слабопозитивною (++), позитивною (+++) та різко позитивною (++++).

Більш чутливою є видозмінена реакція Вассермана – реакція Колмера. З її допомогою виявляються антитіла у сироватках, де реакція Вассермана дала негативний результат.

При різко позитивних реакціях проводиться кількісне визначення реагінів, для чого використовується сироватка в розведеннях від 1:10 до 1:320, що дозволяє використовувати даний вид дослідження контролю ефективності лікування. Наприклад, зниження титру антитіл і подальша їх серонегативація (отримання негативних результатів) говорить про успішне лікування захворювання.

Мал. 5. Аналіз крові на сифіліс – реакція Вассермана.

Мікрореакція преципітації (МРП)

Мікрореакція преципітації застосовується для масових обстежень окремих груп населення, діагностики сифілісу та контролю за ефективністю лікування. Для проведення цього виду дослідження необхідно невеликої кількості досліджуваного матеріалу. В основі мікрореакції преципітації лежить імунологічна реакція антиген-антитіло. У разі наявності антитіл у сироватці крові обстежуваного комплекс антиген-антитіло випадає в осад з утворенням пластівців. Реакція проводиться у лунках спеціальної скляної пластини. Оцінюється за інтенсивністю осаду, що випав, і величиною пластівців в (+) як реакція Вассермана. При обстеженні вагітних, донорів та контролю ефективності лікування не застосовується. VDRL та RPR є різновидами мікрореакцій.

Мал. 6. Вид реакції преципітації у краплі на склі.

Мал. 7. Аналіз крові на сифіліс – реакція мікропреципітації.

Мал. 8. Набір для реакції швидкого визначення реагінів плазми (Тест на сифіліс RPR).

Усі позитивні тести, отримані під час проведення неспецифічних серологічних реакцій, вимагають підтвердження специфічними реакціями — трепонемними тестами.

Діагностика сифілісу із застосуванням трепонемних тестів

Під час проведення трепонемних тестів використовуються антигени трепонемного походження. Їх негативною стороною є неможливість використання для контролю ефективності лікування, отримання позитивних результатів при спірохетозах і невенеричних трепонематозах і отримання хибнопозитивних результатів при онкологічних захворюваннях, лепрі, деякої ендокринної патології. Такі тести, як РПГА, ІФА та РІФ залишаються позитивними багато років після лікування сифілісу, а в деяких випадках і довічно.

РИБТ і РИФ є більш специфічними із усіх серологічних реакцій, що застосовуються для діагностики сифілісу. Вони дозволяють розрізняти хибно-позитивні реакції, виявляти пізні форми сифілісу, що протікають з негативними реакціями. За допомогою РІБТ розпізнаються помилково позитивні реакції у вагітних, коли необхідно вирішити питання про інфікованість дитини.

Реакція іммобілізації блідих трепонем (РІБТ, РІТ)

Суть реакції полягає в тому, що антитіла, що знаходяться в сироватці крові хворого, знерухомлюють бліді трепонеми. Негативною вважається реакція при іммобілізації до 20% збудників, слабопозитивна – 21 – 50%, позитивна – 50 – 100%. РІБТ іноді дає хибнопозитивні результати. Тест складний і трудомісткий, однак, є незамінним при проведенні диференціальної діагностики прихованих форм захворювання та хибнопозитивних результатів серологічних реакцій, у тому числі у вагітних. РІБТ дає 100% позитивний результат при вторинному, ранньому та пізньому сифілісі, у 94 – 100% випадків – при інших формах сифілісу.

Реакція імунофлюоресценції (РІФ)

Суть реакції полягає в тому, що бліді трепонеми (антигени), з'єднані з антитілами, міченими флюорохромами, видають у люмінесцентному мікроскопі жовто-зелене свічення. Результат оцінюється знаком (+). За допомогою РІФ виявляються імуноглобуліни класу А. Реакція імунофлюоресценції стає позитивною раніше, ніж реакція Вассермана. Вона завжди позитивна при вторинному та латентному сифілісі, у 95 - 100% випадків позитивна при третинному та вродженому сифілісі. Техніка проведення цього виду дослідження простіше, ніж у РІБТ, але замінити РІФ на РІБТ неможливо, так дана реакція поступається РІБТ за специфічністю. РІФ-10 (модифікація РІФ) більш чутлива, РІФ-200 та РІФ-абс більш специфічні.

Мал. 9. Аналіз крові на сифіліс – реакція імунофлюоресценції (РІФ).

Реакція імунного прилипання блідих трепонем (РІПБТ)

Суть реакції полягає в тому, що сенсибілізовані сироваткою хворого бліді трепонеми у присутності комплементу прилипають до поверхні еритроцитів. Отримані комплекси при цетрофугуванні випадають осад. Чутливість даного тесту та специфічність близькі до РІФ та РІБТ.

Імуноферментний аналіз на сифіліс (ІФА)

За допомогою ІФА визначаються імуноглобуліни класу М та G. Методика IgM – ІФА може бути використана як скринінговий та підтверджуючий тест. Чутливість ІФА та його специфічність аналогічні РІФ. При сифіліс ІФА дає позитивні результати з третього місяця інфікування і досить довго (іноді все життя) залишається позитивним.

Мал. 10. Імуноферментний аналізатор.

Реакція пасивної (непрямої) гемаглютинації (РПГА)

РПГА заснована на здатності еритроцитів, на яких адсорбовані антигени блідої трепонеми, при сироватці хворого склеюватися (гемагглютинація). РПГА застосовується для діагностики всіх форм сифілісу, зокрема прихованого. При застосуванні високої якості антигену цей вид серологічної реакціїперевищує всі інші тести за специфічністю та чутливістю.

Мал. 11. РПГА застосовується для діагностики всіх форм сифілісу.

Мал. 12. Аналіз на сифіліс – реакція пасивної (непрямої) гемаглютинації (схема).

Мал. 13. Вид перевернутої парасольки, що займає все дно пробірки, свідчить про позитивну реакцію. У разі, коли еритроцити осідають стовпчиком («гудзик») у центрі дна пробірки говорять про негативну реакцію.

Мал. 14. Тест РПГА в лабораторних умов.

Мікробіологічна діагностика

Поряд із серологічною діагностикою методика виявлення блідих трепонем (мікробіологічна діагностика) грає важливу рольособливо в період серонегативного сифілісу, коли ще в крові відсутні антитіла, але вже є перші прояви свіжого первинного сифілісу (твердий шанкер).

Біологічним матеріалом для дослідження служить відокремлюваний з поверхні твердих виразок (шанкров), вміст пустульозних сифілідів, мокнучих та ерозивних папул, пунктати інфікованих лімфатичних вузлів, ліквор та амніотична рідина, для проведення ПЛР - кров.

Найкращою методикою виявлення збудників сифілісу є дослідження біологічного матеріалу темному полі мікроскопа. Дана методика дозволяє побачити бліді трепонеми у живому стані вивчити її особливості будови та руху, відрізнити патогенні збудники від сапрофітів.

Мал. 15. Аналіз на сифіліс – темнопольна мікроскопія.

Мал. 16. При вивченні сухих мазків використовується фарбування по Романівському-Гімзі. Бліді трепонеми забарвлюються при цьому в рожевий колір, решта видів спірохет — у фіолетовий.

Виявлення блідих трепонем при мікроскопії у темному полі - абсолютний критерій остаточної діагностики сифілісу.

Мал. 17. Для виявлення бактерій застосовується реакція імунофлюоресценції (РІФ) – трепонемний тест. Специфічний комплекс антиген-антитіло при поєднанні зі специфічною сироваткою, міченою флюорохромом, у світлі люмінесцентного мікроскопа дає світіння бактерій зеленим кольором.

Мал. 18. Збудники сифілісу добре проглядаються в мазках, приготованих за методикою Левадіті (імпрегнація сріблом). Бліді трепонеми темного кольору на фоні жовтого забарвлення клітин інфікованих тканин.

Мал. 20. На фото колонії блідих трепонем. Отримати культуру бактерій важко. Вони практично не ростуть на штучних живильних середовищах. На середовищах, що містять кінську та кролячу сироватки, колонії з'являються на 3 - 9 добу.

ПЛР на сифіліс

Ефективним та перспективним сьогодні є методика проведення полімеразної ланцюгової реакції. ПЛР на сифіліс дозволяє отримати результат протягом кількох годин, а в зібраному для діагностики матеріалі може бути хоча б кілька збудників захворювання.

Мал. 21. ПЛР на сифіліс дозволяє виявити ДНК або її фрагменти блідих трепонем.

Чутливість даного методу дослідження залежить від наявності у біологічному матеріалі блідих трепонемів і досягає 98,6%. Специфічність даного тесту багато в чому залежить від правильного вибору мішені для ампліфікації під час проведення діагностики та досягає 100%.

Разом з тим, у зв'язку з недостатньо вивченою порівняльною характеристикою чутливості та специфічності прямих методів діагностики сифілісу та ПЛР даний метод обстеження в РФ для діагностики захворювання поки не дозволений.

ПЛР на сифіліс дозволено проводити лише в деяких випадках, як додатковий методдіагностики вродженого сифілісу, нейросифілісу, при утрудненнях проведення діагностики сифілісу з використанням серологічних методів дослідження у ВІЛ-хворих.

Мал. 22. Виявлення ДНК блідої трепонеми із застосуванням ПЛР говорить або про наявність життєздатних бактерій, або про залишки загиблих, але містять здатних до утворення додаткових копій окремих ділянок хромосомної ДНК.